方法

概念

優(yōu)點

缺點

適用場景

直接法

讓酶偶聯(lián)會在表面結合抗原的抗體。

實驗步驟少，可簡化試驗。

1.需要制備在每個實驗中用來檢測的各種偶聯(lián)抗體。

2.包被抗原會非特異性地結合表面，因此他可能會在非天然結構中被呈遞給抗體從而導致更強的背景信號。

1.適合測定樣品中的抗體量，比如感染后的血清抗體水平；2.不適合多種抗體的分析。

間接法

類似于直接ELISA，但不偶聯(lián)抗體。使用第二偶聯(lián)抗體來檢測結合的抗體。

1.在所有不同的實驗中使用相同物種的結合抗體的情況下，可以使用偶聯(lián)的第二抗體來進行多個實驗。

2. 由于二抗一般分為多抗，因此，一個一抗分子上可以結合多個二抗分子。同時，一個二抗分子上可以標記多個酶分子，所以當待測抗體為多抗時，信號經(jīng)過兩步放大，*終提高了檢測的靈敏度。

3.由于二抗制備比較容易，而且很早就開始商品化，所以操作者無需將一抗進行酶標，大大縮減了工作量。

1.實驗步驟耗時更長，更容易出錯。

2.會有更強的背景信號，因為所需的試劑數(shù)量更多，每一種都可能會出現(xiàn)非特異性結合。

1.檢測抗體的效價，血清的效價以及單克隆抗體的篩選。

2.檢測標志性抗體。

直接夾心法

直接將抗原固定在固相上。

更具有特異性。

需要開發(fā)適合實驗的“匹配組”抗體，費錢且耗時。

只能用于識別具有兩個或兩個以上標位的抗體。

間接夾心法

將捕獲抗體固定在固相上以捕獲抗原。

1.進一步放大了信號，提高了靈敏性。

2.由于酶標二抗僅能識別檢測抗體，提高了體系的特異性。

配置“實驗組”費錢且耗時。

只能用于識別具有兩個或兩個以上標位的抗體。

競爭法

讓抗體競爭性的或抑制抗體結合實測數(shù)量的抗原來進行定量。

檢測速度快。

需要較多量的酶標記抗原。

只有一個結合部位的抗原，對小分子抗原如激素和藥物等的測定常用這種方法。