分光光度定義

　　分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～400nm的紫外光區(qū),(2)400～760nm的可見光區(qū),(3)2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照計量規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正。

分光光度計的光譜范圍

　　包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.

　　鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜,光通過三棱鏡折射后,可得到由紅,橙,黃,綠,藍,靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源.

　　氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長的光譜,可作為紫外光光度計的光源.

　　物質的吸收光譜(1)

　　如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.

　　不同物質的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質.

　　物質的吸收光譜(2)

　　當光線通過某種物質的溶液時,透過的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質所吸收,只有一部分光可透過溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光

　　如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失,則:

　　入射光 = 吸收光 十 透過光

簡單原理　　分光光度計計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

使用方法

　　1.接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。

　　2.將靈敏度開關調至“1”檔（若零點調節(jié)器調不到“0”時，需選用較。）

　　3.根據(jù)所需波長轉動波長選擇鈕。

　　4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。

　　5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調節(jié)零點調節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

　　6.蓋上暗箱蓋，調節(jié)“100”調節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

　　7.比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

注意事項

　　1、該儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

　　2、使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。

　　3、在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節(jié)。