培養(yǎng)方法如下：
1、將細(xì)胞稀釋到1000個(gè)細(xì)胞/mL，接種到24孔板，每孔1ml。
2、接種后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。
3、每隔3天跟換1次培養(yǎng)液，保持G418濃度不變。
4、選擇出在10~14天內(nèi)使全部死亡的G418濃度來(lái)進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。由于每種細(xì)胞對(duì)G418的敏感性不同，一般變動(dòng)在100ug/ml～1000ug/ml范圍。
培養(yǎng)步驟：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)*（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)*。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

（1）、 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

（2）、 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。